Спросить врача

Спросить врача

Токсоплазмоз. Диагностика.

М.С. Тищенко, Л.Н. Станкевич, М.Ю. Серебряков, В.А. Беляева

Диагностика токсоплазмоза

Лабораторная диагностика токсоплазмоза до сих пор не нашла широкого распространения в медицинской практике в связи с трудностью определения токсоплазм, необходимостью использовать дорогостоящие диагностикумы и лабораторное оборудование.

В настоящее время наиболее широко используются серологические реакции, а также внутрикожная аллергическая проба с токсоплазмином.

Аллергическая проба с токсоплазмином обычно ставиться в процедурных кабинетах лечебно-профилактических учреждений. Она считается положительной, если на месте введения 0,1 мл стандартного аллергена появляется гиперемия и инфильтрат кожи диаметром не менее 10 мм.

Из серологических реакций при токсоплазмозе наиболее часто применяют реакцию связывания комплемента (РСК), различные агглютинационные тесты: РА, РНГА, РАЛ; с успехом применяется реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ). Все эти реакции достоверно подтверждают динамику нарастания титров специфических антител. Так, например, РНИФ становится положительной с первой недели заболевания и достигает своих максимальных значений (1:128 - 1:5000) ко 2-4-му месяцу болезни и в низких титрах (1:10 - 1:40) может сохраняться длительное время (до 10-15 лет и более). РСК становится положительной со 2-й недели заболевания достигая также высоких цифр ко 2-4-му месяцу болезни (1:160 - 1:320), но уже через 1-3 года эта реакция может стать отрицательной даже без проведения этиотропной терапии или сохраняться длительно в низких титрах.

В Карелии в конце 60-х годов на курсе микробиологии доцентом В.Д. Мельниковым была организована серологическая диагностика токсоплазмоза, в которой в течение более чем 20 лет проводилось обследование на токсоплазмоз в РСК и РИФ. С января 1994 года, в связи с изменением направления научных исследований курса микробиологии, лаборатория диагностики токсоплазмоза прекратила свое существование.

Наиболее перспективным, более чувствительным и специфическим методом диагностики токсоплазмоза из всех серологических реакций в настоящее время считается иммуноферментный анализ (ИФА), который внедрен в работу иммунологической лаборатории Республиканского центра по профилактике и борьбе со СПИД. Хорошо себя зарекомендовали диагностические тест-системы "Соватест" (Чехия) и "Лабсистемс" (Финляндия) для выявления антител классов IgM и IgG к токсоплазмам. Данные тест-системы можно применять с целью диагностики токсоплазмоза у всех обследуемых, в том числе и инфицированных ВИЧ.

В последние годы разработаны и широко применяются в практических лабораториях тест-системы для выявления антител класса IgM и IgG в иммуноферментном анализе (ИФА). IgM антитела к Т.gondii обычно не присутствуют на значительном уровне более 1 года после первичного инфицирования и не наблюдаются во время реактивации. Поэтому качественное определение наличия анти-Т.gondii IgM антител дает быстрое подтверждение острой или недавней инфекции. Более того, проверка на анти-Т.gondii IgM-антитела у новорожденного одновременно с проверкой материнских анти-Т.gondii IgM-антител позволяет осуществлять раннюю диагностику врожденного токсоплазмоза.

Количественная проверка на IgG-антитела к T/gondii является прагматическим диагностическим подходом к определению иммунного статуса беременной женщины и новорожденного. IgG-антитела против токсоплазм могут присутствовать в организме в течение всей жизни. Следовательно, постоянный титр IgG-антител указывает на более раннее инфицирование , в то время как четырехкратное и более увеличение титров является признаком активной инфекции. Последовательное многократное определение уровня IgG-антител у новорожденных позволяет отличить врожденное заражение (постоянный уровень) от неонатального (нарастание титров).

Таблица 2

Результаты анализов и их интерпретация

Результаты

Интерпретация

IgM

IgG

-

+

Женщина имеет иммунитет, нет причин для тревоги

+

низкий титр

Недавнее инфицирование, рекомендуется аборт

низкий титр

+

Рекомендуется повторить тест через две недели

Примечание: Если титр IgG антител при повторном (через две недели) анализе не увеличивается, то причин для тревоги нет, если титр IgG растет, следует рассмотреть вопрос об аборте.

Интерпретация результатов ИФА более объективна, поскольку ориентируется на Международный стандарт ВОЗ. О положительных реакциях могут свидетельствовать показатели, выраженные в единицах оптической плотности (ОП) > 1,5; иммуноферментных единицах (EIn) > 60; международных единицах (МЕ) > 125 и в титрах антител — 1:1600. В целом к этому методу также применим основной принцип серологической диагностики — динамика нарастания положительных результатов, которые могут достичь показателей превышающих исходные точки отсчета в 2-3-10 раз.

Однако нельзя забывать, что у больных СПИДом синтез специфических антител к токсоплазмам может быть резко ослаблен, поэтому в ряде случаев более надежным методом лабораторной диагностики является выявление антигенов токсоплазм. Для этих целей также применим ИФА и иммуноблотинг. В последние годы показана возможность применения метода молекулярной гибридизации для подтверждения паразитарной природы висцеральных поражений у больных СПИДом.

Трудно выполнимым, но достаточно чувствительным и надежным является выделение токсоплазм из крови и очагов поражения с помощью однослойных культур клеток. При этом положительные результаты могут быть получены через 3-5 суток. Подтверждение диагноза токсоплазмоза возможно и в биопробах на мышах, которым вводят гомогенаты биопсированных тканей головного мозга или других органов больного. Полезным диагностическим методом является компьютерная томография и ядерный магнитный резонанс. Возможно использование электронной микроскопии для получения ответа о стадии развития токсоплазм. Эти методы в настоящее время используются в специализированных отделениях и токсоплазмозных центрах, где имеется специальное оборудование и обученный персонал.

Таким образом диагностика токсоплазмоза должна базироваться на комплексе различных методов исследования. В этом плане обычно отдается предпочтение легко доступным, высоко чувствительным, специфичным и недорогим диагностическим тестам. Все этим требованиям в настоящее время отвечает ИФА.

Так как симптомы токсоплазмоза могут отличаться крайним разнообразием и не являются специфичными, поставить диагноз только на основании жалоб больного практически невозможно. Поэтому при диагностике токсоплазмоза возрастает значимость лабораторных методов исследования и диагностики. Лабораторные методы диагностики токсоплазмоза включают в себя паразитологические и иммунологические методы.

Паразитологические методы диагностики токсоплазмоза основаны на непосредственном обнаружении и обследовании токсоплазмы в организме больного человека.

Токсоплазмы выявляются либо при анализе клеток больного человека, либо при заражении восприимчивых к токсоплазмозу животных.

Биоматериалом для паразитологического исследования могут быть любые биологические жидкости (кровь, слюна, спинномозговая жидкость), а также пробы органов и тканей, полученные при биопсии.

При паразитологическом исследовании возбудителя-токсоплазму можно выделить в чистом виде, можно увидеть ее при прямой микроскопии окрашенного препарата нативного материала, либо обнаружить его генетический материал (полимеразная цепная реакция или ПЦР).

Однако паразитологическое исследование имеет и существенные недостатки, снижающие его ценность и ограничивающие применение на практике. Дело в том, что токсоплазмы, обнаруженные в биоматериале, говорят только о том, что человек был инфицирован токсоплазмозом, но не дают никаких сведений о том, насколько давно это было. С другой стороны, отсутствие в исследуемом препарате токсоплазмы не говорит о том, что токсоплазмоза у человека нет.

Во-первых, токсоплазмы, уже проникшие внутрь тканей, не живут в жидкостях, которые можно взять на анализ, поэтому в исследуемый материал возбудитель может просто не попасть.

Во-вторых, для того, чтобы токсоплазма сохранилась живой в биоматериале, нужны определенные условия, а при их несоблюдении возбудитель токсоплазмоза просто не доживает до микроскопии. Поэтому результаты паразитологических исследований всегда должны соотноситься с клинической картиной заболевания.

В настоящее время паразитологические методы диагностики токсоплазмоза применяются при врожденном токсоплазмозе у детей до 1 года, при токсоплазмозе у больных СПИДом, а также при поражении токсоплазмами глаз – то есть в тех случаях, когда давность инфицирования не играет роли и важно просто ответить на вопрос: есть ли в организме токсоплазмы.

Более точную информацию может дать иммунологическое исследование на токсоплазмоз. Существует несколько иммунологических методов диагностики.

На сегодняшний день лидирующее положение среди них занимает иммуноферментный анализ – ИФА.

Суть этого метода — определение специфических антител к токсоплазме, при этом не только определяется не только присутствие или отсутствие этих антител, но и их количество. Для исследования на антитела могут использоваться не только сыворотка крови, но и спинномозговая жидкость, содержимое стекловидного тела, околоплодные воды. ИФА помогает определить и давность заражения человека токсоплазмозом. Дело в том, что человеческий организм вырабатывает антитела (иммуноглобулины) двух типов: ранние антитела IgM появляются в крови непосредственно после заражения и сохраняются не дольше года. Затем они исчезают и не появляются уже никогда. Через некоторое время после заражения токсоплазмозом, вслед за IgM, в крови появляются другие антитела — IgG, которые сохраняются в ней в течение всей последующей человеческой жизни.

Следовательно, при определении антител к токсоплазмозу, можно сделать вывод о том, насколько давно произошло заражение: если обнаруживаются только антитела IgM, это значит, что человек заразился токсоплазмозом совсем недавно. Если же при проведении ИФА обнаруживается только IgG, а IgM отсутствует, то это говорит о том, что заражение произошло больше года назад, и организм уже выработал иммунитет к токсоплазме. Эти данные особенно важны при обследовании беременных женщин или женщин, планирующих беременность. Дело в том, что перенесенный в прошлом токсоплазмоз никаким образом не влияет на плод, а «свежая» инфекция может быть губительна для ребенка.


Обсуждение:


спрятать